Остеоартритис (ОА) је једна од дуготрајних хроничних дегенеративних болести костију и зглобова која погађа популацију старију од 65 година [
1Генерално, пацијентима са остеоартритом дијагностикује се оштећена хрскавица, упаљена синовијумска мембрана и еродирани хондроцити, што изазива бол и физичку нелагоду [
2]. Артритични бол је претежно узрокован дегенерацијом хрскавице у зглобовима услед упале, а када је хрскавица озбиљно оштећена, кости могу да се сударају једна са другом, узрокујући неподношљив бол и физичке тешкоће [
3]. Укљученост инфламаторних медијатора са симптомима као што су бол, оток и укоченост зглоба је добро документована. Код пацијената са остеоартритом, инфламаторни цитокини, који изазивају ерозију хрскавице и субхондралне кости, налазе се у синовијалној течности [
4Две главне тегобе које пацијенти са остеоартритисом генерално имају су бол и синовијална упала. Стога су примарни циљеви тренутних терапија за остеоартритис смањење бола и упале. [
5Иако су доступни третмани за остеоартритис, укључујући нестероидне и стероидне лекове, показали ефикасност у ублажавању бола и упале, дуготрајна употреба ових лекова има озбиљне здравствене последице као што су кардиоваскуларне, гастроинтестиналне и бубрежне дисфункције [
6Стога, за лечење остеоартритиса мора се развити ефикаснији лек са мање нежељених ефеката.
Природни здравствени производи постају све популарнији јер су безбедни и лако доступни [
7Традиционални корејски лекови су доказали ефикасност против неколико инфламаторних болести, укључујући артритис [
8]. Аукландија лапа (Aucklandia lappa DC.) је позната по својим лековитим својствима, као што је побољшање циркулације ћи енергије за ублажавање болова и смиривање желуца, а традиционално се користи као природни аналгетик [
9]. Претходни извештаји указују да A. lappa поседује антиинфламаторна дејства [
10,
11], аналгетик [
12], антиканцер [
13] и гастропротективни [
14] ефекти. Различите биолошке активности A. lappa узроковане су њеним главним активним једињењима: костунолид, дехидрокостус лактон, дихидрокостунолид, костуслактон, α-костол, саусуреа лактон и костуслактон [
15]. Раније студије тврде да је костунолид показао антиинфламаторна својства у липополисахариду (ЛПС), што је индуковало макрофаге кроз регулацију NF-kB и пута протеина топлотног шока [
16,
17]. Међутим, ниједна студија није истраживала потенцијалне активности A. lappa за лечење остеоартритиса. Ово истраживање је истраживало терапеутске ефекте A. lappa против остеоартритиса користећи моделе глодара индуковане (мононатријум-јодоацетатом) МИА и сирћетном киселином.
Мононатријум-јодоацетат (МИА) је познат по својој употреби за изазивање многих болних понашања и патофизиолошких карактеристика остеоартритиса код животиња [
18,
19,
20]. Када се убризга у зглобове колена, МИА ремети метаболизам хондроцита и изазива упалу и инфламаторне симптоме, као што су ерозија хрскавице и субхондралне кости, кардинални симптоми остеоартритиса [
18]. Реакција извијања изазвана сирћетном киселином се широко сматра симулацијом периферног бола код животиња где се инфламаторни бол може квантитативно мерити [
19]. Ћелијска линија мишјих макрофага, RAW264.7, популарно се користи за проучавање ћелијских одговора на упалу. Након активације са LPS, RAW264 макрофаги активирају инфламаторне путеве и луче неколико инфламаторних посредника, као што су TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS и IL-6 [
20]. Ова студија је проценила антиноцицептивне и антиинфламаторне ефекте A. lappa против остеоартритиса код животињског модела MIA, животињског модела индукованог сирћетном киселином и ћелија RAW264.7 активираних LPS-ом.
2. Материјали и методе
2.1. Биљни материјал
Осушени корен биљке A. lappa DC. који је коришћен у експерименту набављен је од компаније Epulip Pharmaceutical Co., Ltd. (Сеул, Кореја). Идентификовао га је проф. Донгхун Ли, са Одељења за биљну фармакологију, Катедре за корејску медицину, Универзитета Гачон, а број узорка за ваучер је депонован као 18060301.
2.2. HPLC анализа екстракта A. lappa
А. lappa је екстрахована помоћу рефлукс апарата (дестилована вода, 3 сата на 100 °C). Екстраховани раствор је филтриран и кондензован помоћу испаривача ниског притиска. Екстракт А. lappa је имао принос од 44,69% након лиофилизације на -80 °C. Хроматографска анализа А. lappa је спроведена помоћу HPLC-а повезаног са 1260 Infinity II HPLC-системом (Agilent, Pal Alto, CA, САД). За хроматско раздвајање коришћена је EclipseXDB C18 колона (4,6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) на 35 °C. Укупно 100 mg узорка је разблажено у 10 mL 50% метанола и соницирано 10 минута. Узорци су филтрирани помоћу шприц филтера (Waters Corp., Milford, MA, САД) од 0,45 μm. Састав мобилне фазе је био 0,1% фосфорне киселине (А) и ацетонитрила (Б), а колона је елуирана на следећи начин: 0–60 мин, 0%; 60–65 мин, 100%; 65–67 мин, 100%; 67–72 мин, 0% растварача Б са брзином протока од 1,0 mL/min. Ефлуент је посматран на 210 nm коришћењем запремине убризгавања од 10 μL. Анализа је извршена у три примерка.
2.3. Смештај и управљање животињама
Мужјаци пацова Sprague–Dawley (SD) старости 5 недеља и мужјаци мишева ICR старости 6 недеља купљени су од Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Кореја). Животиње су држане у просторији са константном температуром (22 ± 2 °C) и влажношћу (55 ± 10%) и циклусом светло/там од 12/12 сати. Животиње су упознате са условима више од недељу дана пре почетка експеримента. Животиње су имале храну и воду по вољи. Тренутна етичка правила за негу и руковање животињама на Универзитету Gachon (GIACUC-R2019003) строго су поштована у свим експерименталним процедурама на животињама. Студија је осмишљена као паралелно испитивање са слепим испитивачима. Пратили смо метод еутаназије према смерницама Комитета за етику експеримената на животињама.
2.4. Ињекција и лечење МИА
Пацови су насумично подељени у 4 групе, наиме лабораторијско, контролну, индометацин и A. lappa. Након анестезије са 2% изофлуоран O2 смешом, пацовима је убризгано 50 μL MIA (40 мг/м2; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, САД) интраартикуларно у зглобове колена како би се изазвала експериментална остеоартритиса. Третмани су спроведени на следећи начин: контролна и лабораторијско-испитивана група су одржаване само са основном исхраном AIN-93G. Само је индометацин групи дат индометацин (3 мг/кг) укључен у AIN-93G исхрану, а група A. lappa 300 мг/кг је додељена AIN-93G исхрани допуњеној са A. lappa (300 мг/кг). Третмани су настављени 24 дана од дана индукције остеоартритиса, брзином од 15–17 г по 190–210 г телесне тежине дневно.
2.5. Мерење тежине носача
Након индукције остеоартритиса, мерење носивости задњих удова пацова је извршено помоћу incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, САД) према распореду. Израчуната је расподела тежине на задњим удовима: носивост (%)
