Остеоартритис (ОА) је једно од дуготрајних хроничних дегенеративних болести зглобова костију које погађа популацију старије од 65 година [
1]. Генерално, пацијентима са ОА се дијагностикује оштећена хрскавица, упаљена синовија и еродирани хондроцити, што изазива бол и физички стрес [
2]. Артртични бол је претежно узрокован дегенерацијом хрскавице у зглобовима упалом, а када је хрскавица озбиљно оштећена, кости могу да се сударе једна са другом изазивајући неподношљив бол и физичке потешкоће [
3]. Учешће инфламаторних медијатора са симптомима као што су бол, оток и укоченост зглоба је добро документовано. Код пацијената са ОА, инфламаторни цитокини, који изазивају ерозију хрскавице и субхондралне кости налазе се у синовијалној течности [
4]. Две главне притужбе које пацијенти са ОА генерално имају су бол и синовијална упала. Стога су примарни циљеви тренутних терапија ОА смањење бола и упале. [
5]. Иако су доступни третмани за ОА, укључујући нестероидне и стероидне лекове, доказали ефикасност у ублажавању бола и упале, дуготрајна употреба ових лекова има озбиљне здравствене последице као што су кардиоваскуларне, гастроинтестиналне и бубрежне дисфункције [
6]. Стога се за лечење остеоартритиса мора развити ефикаснији лек са мање нежељених ефеката.
Природни здравствени производи постају све популарнији јер су безбедни и лако доступни [
7]. Традиционални корејски лекови су доказали своју ефикасност против неколико инфламаторних болести, укључујући артритис [
8]. Ауцкландиа лаппа ДЦ. је познат по својим лековитим својствима, као што је побољшање циркулације чи-ја за ублажавање болова и умирење желуца, и традиционално се користи као природни аналгетик [
9]. Ранији извештаји сугеришу да А. лаппа поседује антиинфламаторно [
10,
11], аналгетик [
12], антиканцер [
13] и гастропротективни [
14] ефекти. Различите биолошке активности А. лаппа узроковане су њеним главним активним једињењима: костунолид, дехидрокостус лактон, дихидрокостунолид, костулактон, α-костол, сосуреа лактон и костуслактон [
15]. Раније студије тврде да је костунолид показао антиинфламаторна својства у липополисахариду (ЛПС), који је индуковао макрофаге кроз регулацију НФ-кБ и пут протеина топлотног шока [
16,
17]. Међутим, ниједна студија није истраживала потенцијалне активности А. лаппа за лечење ОА. Ово истраживање је истраживало терапијске ефекте А. лаппа против ОА користећи (мононатријум-јодоацетат) МИА и моделе глодара изазваних сирћетном киселином.
Моннатријум-јодоацетат (МИА) се чувено користи за изазивање већине болних понашања и патофизиолошких карактеристика ОА код животиња [
18,
19,
20]. Када се убризгава у зглобове колена, МИА поремети метаболизам хондроцита и изазива упалу и упалне симптоме, као што су ерозија хрскавице и субхондралне кости, кардинални симптоми ОА [
18]. Одговор на грчење изазван сирћетном киселином се широко сматра симулацијом периферног бола код животиња где се инфламаторни бол може квантитативно измерити [
19]. Ћелијска линија макрофага миша, РАВ264.7, популарно се користи за проучавање ћелијских одговора на упалу. Након активације са ЛПС, РАВ264 макрофаги активирају инфламаторне путеве и луче неколико посредника запаљења, као што су ТНФ-α, ЦОКС-2, ИЛ-1β, иНОС и ИЛ-6 [
20]. Ова студија је проценила анти-ноцицептивне и антиинфламаторне ефекте А. лаппа против ОА у животињском моделу МИА, животињском моделу изазваном сирћетном киселином и ћелијама РАВ264.7 активираним ЛПС.
2. Материјали и методе
2.1. Биљни материјал
Осушени корен А. лаппа ДЦ. коришћен у експерименту набављен је од Епулип Пхармацеутицал Цо., Лтд., (Сеул, Кореја). Идентификовао га је проф. Донгхун Лее, одељење за биљну фармакологију, пуковник корејске медицине, Универзитет Гацхон, а број узорка ваучера је депонован као 18060301.
2.2. ХПЛЦ анализа екстракта А. лаппа
А. лаппа је екстрахована помоћу апарата за рефлукс (дестилована вода, 3 х на 100 °Ц). Екстраховани раствор је филтриран и кондензован коришћењем испаривача ниског притиска. Екстракт А. лаппа имао је принос од 44,69% након сушења замрзавањем под -80 °Ц. Хроматографска анализа А. лаппа је спроведена помоћу ХПЛЦ спојеног помоћу 1260 ИнфинитиⅡ ХПЛЦ система (Агилент, Пал Алто, Калифорнија, САД). За хроматско раздвајање коришћена је ЕцлипсеКСДБ Ц18 колона (4,6 × 250 мм, 5 µм, Агилент) на 35 °Ц. Укупно 100 мг узорка је разблажено у 10 мЛ 50% метанола и соникирано 10 мин. Узорци су филтрирани помоћу филтера шприца (Ватерс Цорп., Милфорд, МА, САД) од 0,45 μм. Састав мобилне фазе је био 0,1% фосфорне киселине (А) и ацетонитрила (Б), а колона је елуирана на следећи начин: 0–60 мин, 0%; 60–65 мин, 100%; 65–67 мин, 100%; 67–72 мин, 0% растварач Б са брзином протока од 1,0 мЛ/мин. Ефлуент је примећен на 210 нм коришћењем запремине ињекције од 10 μЛ. Анализа је обављена у три примерка.
2.3. Смештај и управљање животињама
Мужјаци Спрагуе-Давлеи (СД) пацова старости 5 недеља и мужјаци ИЦР мишева старости 6 недеља купљени су од Самтако Био Кореа (Гиеонгги-до, Кореја). Животиње су држане у просторији користећи константну температуру (22 ± 2 °Ц) и влажност (55 ± 10%) и циклус светлости/мрака од 12/12 х. Животиње су биле упознате са стањем више од недељу дана пре почетка експеримента. Животиње су имале ад либитум залихе хране и воде. Тренутна етичка правила за бригу о животињама и руковање на Универзитету Гацхон (ГИАЦУЦ-Р2019003) стриктно су поштована у свим експерименталним поступцима на животињама. Студија је осмишљена као истраживачко заслепљено и паралелно испитивање. Пратили смо метод еутаназије у складу са смерницама Етичког комитета за експерименте на животињама.
2.4. МИА ињекција и лечење
Пацови су насумично подељени у 4 групе, и то лажна, контролна, индометацин и А. лаппа. Пошто су анестезирани са 2% смешом изофлуорана О2, пацовима је убризгано 50 μЛ МИА (40 мг/м; Сигма-Алдрицх, Ст. Лоуис, МО, САД) интраартикуларно у зглобове колена да би се дошло до експерименталне ОА. Третмани су спроведени на следећи начин: контролна и лажна група су одржаване само са АИН-93Г основном исхраном. Само, индометацинска група је добила индометацин (3 мг/кг) уграђен у АИН-93Г исхрану, а група А. лаппа од 300 мг/кг је додељена АИН-93Г исхрани са додатком А. лаппа (300 мг/кг). Третмани су настављени 24 дана од дана индукције ОА брзином од 15–17 г по 190–210 г телесне тежине на дневној бази.
2.5. Мерење тежине
Након индукције ОА, мерење носивости задњих удова пацова извршено је помоћу инцапацитанце-МетерТестер600 (ИИТЦ Лифе Сциенце, Воодланд Хиллс, Калифорнија, САД) према распореду. Израчуната је расподела тежине на задњим удовима: носивост (%)
