Чисто уље Сапосхниковиа диварицата за производњу свијећа и сапуна велепродајно етерично уље дифузора ново за дифузоре са горионицима с трском
кратак опис:
2.1. Припрема СДЕ
Ризоми СД су набављени као сушена биљка од Ханхерб Цо. (Гури, Кореја). Биљни материјал је таксономски потврдио др Го-Иа Цхои са Корејског института за оријенталну медицину (КИОМ). Узорак ваучера (број 2014 СДЕ-6) депонован је у Корејски хербаријум стандардних биљних ресурса. Осушени ризоми СД (320 г) екстраховани су два пута са 70% етанолом (са рефлуксом од 2 х) и екстракт је затим концентрован под сниженим притиском. Декокција је филтрирана, лиофилизована и чувана на 4°Ц. Принос осушеног екстракта из сирових полазних материјала био је 48,13% (тежински).
2.2. Квантитативна течна хроматографија високих перформанси (ХПЛЦ) анализа
Хроматографска анализа је изведена са ХПЛЦ системом (Ватерс Цо., Милфорд, МА, УСА) и детектором фотодиодног низа. За ХПЛЦ анализу СДЕ, прим-O-Глукозилцимифугин стандард је набављен од Кореа Промотион Институте фор Традитионал Медицине Индустри (Гиеонгсан, Кореја), исец-О-глукозиламаудол и 4′-O-β-Д-глукозил-5-O-метилвисаминол су изоловани у нашој лабораторији и идентификовани спектралним анализама, првенствено НМР и МС.
СДЕ узорци (0,1 мг) растворени су у 70% етанолу (10 мЛ). Хроматографско одвајање је изведено са КССелецт ХСС Т3 Ц18 колоном (4,6 × 250 мм, 5μм, Ватерс Цо., Милфорд, МА, САД). Мобилна фаза се састојала од ацетонитрила (А) и 0,1% сирћетне киселине у води (Б) при брзини протока од 1,0 мЛ/мин. Програм вишестепеног градијента је коришћен на следећи начин: 5% А (0 мин), 5–20% А (0–10 мин), 20% А (10–23 мин) и 20–65% А (23–40 мин ). Таласна дужина детекције је скенирана на 210–400 нм и забележена на 254 нм. Запремина ињекције је била 10,0μЛ. Стандардни раствори за одређивање три хромона припремљени су у коначној концентрацији од 7,781 мг/мЛ (прим-O-глукозилцимифугин), 31,125 мг/мЛ (4′-O-β-Д-глукозил-5-O-метилвисаминол) и 31,125 мг/мЛ (сец-О-глукозилхамаудол) у метанолу и чуван на 4°Ц.
РАВ 264.7 ћелије су добијене из Америчке колекције типских култура (АТЦЦ, Манассас, ВА, САД) и узгајане у ДМЕМ медијуму који садржи 1% антибиотика и 5,5% ФБС. Ћелије су инкубиране у влажној атмосфери од 5% ЦО2 на 37°Ц. Да би се стимулисале ћелије, медијум је замењен свежим ДМЕМ медијумом и липополисахаридом (ЛПС, Сигма-Алдрицх Цхемицал Цо., Ст. Лоуис, МО, УСА) на 1μг/мЛ је додат у присуству или одсуству СДЕ (200 или 400μг/мЛ) додатних 24 х.
Ћелије су третиране са СДЕ и стимулисане са ЛПС током 24 х. Производња НО је анализирана мерењем нитрита коришћењем Грисовог реагенса према претходној студији [12]. Секреција инфламаторних цитокина ПГЕ2, ТНФ-α, а ИЛ-6 је одређен коришћењем ЕЛИСА комплета (Р&Д системи) према упутствима произвођача. Ефекти СДЕ на производњу НО и цитокина одређени су на 540 нм или 450 нм помоћу Валлац ЕнВисион™читач микроплоча (ПеркинЕлмер).
Мужјаци Спрагуе-Давлеи пацова (стари 7 недеља) су купљени од Самтако Инц. (Осан, Кореја) и смештени у контролисаним условима са 12-сатним циклусом светлост/мрак на°Ц и% влажности. Пацовима је обезбеђена лабораторијска исхрана и водаад либитум. Све експерименталне процедуре су изведене у складу са смерницама Националног института за здравље (НИХ) и одобрене од стране Комитета за негу и употребу животиња Универзитета Даејеон (Даејеон, Република Кореја).
2.4.2. Индукција ОА са МИА код пацова
Животиње су рандомизиране и распоређене у групе за третман пре почетка студије (по групи). МИА раствор (3 мг/50μЛ 0,9% физиолошког раствора) директно је убризган у интраартикуларни простор десног колена под анестезијом изазваном мешавином кетамина и ксилазина. Пацови су насумично подељени у четири групе: (1) група физиолошког раствора без ињекције МИА, (2) група МИА са ињекцијом МИА, (3) група третирана СДЕ (200 мг/кг) са ињекцијом МИА и (4 ) група третирана индометацином (ИМ-) (2 мг/кг) са ињекцијом МИА. Пацовима је даван орално са СДЕ и ИМ 1 недељу пре ињекције МИА током 4 недеље. Дозе СДЕ и ИМ коришћене у овој студији засноване су на онима које су коришћене у претходним студијама [10,13,14].
2.4.3. Мерења дистрибуције тежине задње шапе
Након индукције ОА, првобитна равнотежа у способности ношења тежине задњих шапа је поремећена. Тестер неспособности (Линтон инструментатион, Норфолк, УК) је коришћен за процену промена у толеранцији на носивост. Пацови су пажљиво стављени у мерну комору. Сила ношења тежине коју врши задњи екстремитет је усредњена за период од 3 с. Однос дистрибуције тежине израчунат је следећом једначином: [тежина десног задњег екстремитета/(тежина десног задњег екстремитета + тежина левог задњег уда)] × 100 [15].
2.4.4. Мерење нивоа цитокина у серуму
Узорци крви су центрифугирани на 1500 г током 10 минута на 4°Ц; затим је серум сакупљен и чуван на -70°Ц до употребе. Нивои ИЛ-1β, ИЛ-6, ТНФ-α, и ПГЕ2 у серуму су мерени коришћењем ЕЛИСА комплета из Р&Д Системс (Миннеаполис, МН, САД) према упутствима произвођача.
2.4.5. Квантитативна РТ-ПЦР анализа у реалном времену
Укупна РНК је екстрахована из ткива зглоба колена коришћењем ТРИ реагенса® (Сигма-Алдрицх, Ст. Лоуис, МО, САД), реверзно транскрибована у цДНК и ПЦР-амплификована коришћењем ТМ Оне Степ РТ ПЦР комплета са СИБР зеленом (Апплиед Биосистемс , Гранд Исланд, НИ, САД). Квантитативни ПЦР у реалном времену је изведен коришћењем Апплиед Биосистемс 7500 Реал-Тиме ПЦР система (Апплиед Биосистемс, Гранд Исланд, НИ, УСА). Секвенце прајмера и секвенце сонде су приказане у табели1. Аликвоти узорка цДНК и једнака количина ГАПДХ цДНК су амплификовани са ТакМан® Универсал ПЦР мастер смешом која садржи ДНК полимеразу према упутствима произвођача (Апплиед Биосистемс, Фостер, Калифорнија, САД). ПЦР услови су били 2 мин на 50°Ц, 10 мин на 94°Ц, 15 с на 95°Ц и 1 мин на 60°Ц током 40 циклуса. Концентрација циљног гена је одређена коришћењем компаративне методе Цт (број циклуса прага на укрштању између графикона амплификације и прага), према упутствима произвођача.
Остеоартритис (ОА) је најчешћи мишићно-скелетни поремећај и најчешћа дегенеративна болест зглобова код старијих [1]. ОА је стање делимично узроковано повредом, губитком структуре и функције хрскавице и дисрегулацијом проинфламаторних и антиинфламаторних путева [2,3]. Првенствено утиче на зглобну хрскавицу и субхондралну кост синовијалних зглобова и доводи до отказивања зглобова, што доводи до бола при ношења тежине, укључујући ходање и стајање [4].
Не постоји лек за ОА, јер је веома тешко обновити хрскавицу када је уништена [5]. Циљеви лечења су ублажавање болова, одржавање или побољшање покретљивости зглобова, повећање снаге зглобова и минимизирање онеспособљавајућих ефеката болести. Фармаколошки третмани ОА имају за циљ смањење болова како би се побољшала функција зглоба и квалитет живота пацијената. Иако је деструкција хрскавице главни догађај у ОА, деградација колагена је фундаментални инцидент који одређује иреверзибилну прогресију ОА у вези са упалом [6,7]. Очекује се да ће третмани са антиинфламаторним и хондропротективним деловањем ублажити бол и одржати интегритет матрикса код пацијената са ОА.
Стога ће смањење упале вероватно бити од користи у управљању ОА. Недавне студије указују на заштитну улогу биљних ресурса у прогресији ОА, у смислу ублажавања упале хондроцита и даљег уништавања хрскавице, кроз њихову способност интеракције са ткивима повезаним са зглобовима, што резултира ублажавањем болова у зглобовима [8].
Корен одСапосхниковиа диварицатаСцхисцхкин (Умбеллиферае) се широко користи у традиционалној медицини за лечење главобоље, бола, упале и артритиса у Кореји и Кини [9,10]. Разноврсни фармаколошки ефектиСапосхниковиа диварицата(СД) такође укључују антиинфламаторна, аналгетичка, антипиретичка и антиартритичка својства [9,11]. Недавна студија је показала да екстракт СД хромона поседује потенцијалне ефекте антиреуматоидног артритиса у мишјем моделу артритиса изазваног колагеном [10]; међутим, спроведено је неколико студија које подржавају антиинфламаторну и антиартритисну активностСапосхниковиа диварицатаекстракт (СДЕ).
Стога је ова студија истраживала антиинфламаторне и антиостеоартритисне активности 70% етанолног екстракта СД. Прво је процењен антиинфламаторни ефекат СДЕин витроу ћелијама РАВ 264.7 изазваним ЛПС. Затим, антиостеоартритични ефекат СДЕ је мерен проценом дистрибуције тежине, деградације зглобне хрскавице и инфламаторних одговора у моделу ОА изазване мононатријум јодоацетатом (МИА-) код пацова.