Чисто уље Сапошниковије диварицате за израду свећа и сапуна, велепродајно дифузорско етерично уље, ново за дифузоре са трском

кратак опис:

 

2.1. Припрема SDE

Ризиоми SD су купљени као сушена биљка од компаније Hanherb Co. (Гури, Кореја). Биљни материјал је таксономски потврдио др Го-Ја Чои из Корејског института за оријенталну медицину (KIOM). Ваучерски узорак (број 2014 SDE-6) је депонован у Корејском хербаријуму стандардних биљних ресурса. Осушени ризоми SD (320 г) су два пута екстраховани са 70% етанолом (уз 2 сата рефлукса) и екстракт је затим концентрован под сниженим притиском. Декокт је филтриран, лиофилизован и чуван на 4°C. Принос сувог екстракта из сирових полазних материјала био је 48,13% (w/w).

 

2.2. Квантитативна анализа високоефикасном течном хроматографијом (HPLC)

Хроматографска анализа је спроведена помоћу HPLC система (Waters Co., Милфорд, MA, САД) и фотодиодног детектора. За HPLC анализу SDE, прим-O-глукозилцимифугин стандард је купљен од Корејског института за промоцију традиционалне медицине (Гјонгсан, Кореја), исек-О-глукозилхамаудол и 4′-O-β-D-глукозил-5-O-метилвисаминол су изоловани у нашој лабораторији и идентификовани спектралним анализама, првенствено NMR и MS.

Узорци SDE (0,1 mg) су растворени у 70% етанолу (10 mL). Хроматографско раздвајање је извршено помоћу XSelect HSS T3 C18 колоне (4,6 × 250 mm, 5μм, Вотерс Ко., Милфорд, Масачусетс, САД). Мобилна фаза се састојала од ацетонитрила (А) и 0,1% сирћетне киселине у води (Б) при брзини протока од 1,0 мл/мин. Коришћен је вишестепени градијентни програм на следећи начин: 5% А (0 мин), 5–20% А (0–10 мин), 20% А (10–23 мин) и 20–65% А (23–40 мин). Таласна дужина детекције је скенирана на 210–400 нм и забележена на 254 нм. Запремина убризгавања је била 10,0μЛ. Стандардни раствори за одређивање три хромона припремљени су у коначној концентрацији од 7,781 мг/мл (прим-O-глукозилцимифугин), 31,125 мг/мл (4′-O-β-D-глукозил-5-O-метилвисаминол) и 31,125 мг/мл (сек-О-глукозилхамаудол) у метанолу и чуван на 4°C.

2.3. Процена антиинфламаторне активностиИн витро

2.3.1. Ћелијска култура и третман узорака

Ћелије RAW 264.7 су добијене из Америчке колекције типових култура (ATCC, Манасас, Вирџинија, САД) и узгајане су у DMEM медијуму који садржи 1% антибиотика и 5,5% FBS. Ћелије су инкубиране у влажној атмосфери од 5% CO2 на 37°C. Да би се стимулисале ћелије, медијум је замењен свежим DMEM медијумом и липополисахаридом (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., Сент Луис, Мисури, САД) на 1μг/мл је додато у присуству или одсуству СДЕ (200 или 400μг/мл) током додатних 24 сата.

2.3.2. Одређивање азотног оксида (NO), простагландина Е2 (PGE2), фактора туморске некрозе-α(TNF-α) и производња интерлеукина-6 (IL-6)

Ћелије су третиране са SDE и стимулисане са LPS током 24 сата. Производња NO је анализирана мерењем нитрита коришћењем Грисовог реагенса према претходној студији [12]. Секреција инфламаторних цитокина PGE2, TNF-α, а IL-6 је одређен коришћењем ELISA комплета (R&D systems) према упутствима произвођача. Ефекти SDE на производњу NO и цитокина одређени су на 540 nm или 450 nm коришћењем Wallac EnVision апарата.™читач микроплоча (PerkinElmer).

2.4. Евалуација антиостеоартритске активностиИн виво

2.4.1. Животиње

Мужјаци пацова Sprague-Dawley (стари 7 недеља) су купљени од компаније Samtako Inc. (Осан, Кореја) и смештени су у контролисаним условима са 12-часовним циклусом светлости/мрака на°C и% влажности. Пацовима је обезбеђена лабораторијска исхрана и водапо вољиСве експерименталне процедуре су спроведене у складу са смерницама Националног института за здравље (NIH) и одобрене од стране Комитета за негу и коришћење животиња Универзитета у Теџону (Теџон, Република Кореја).

2.4.2. Индукција остеоартритиса са МИА код пацова

Животиње су рандомизоване и распоређене у групе за третман пре почетка студије (по групи). Раствор МИА (3 мг/50μЛ 0,9% физиолошког раствора) је директно убризган у интраартикуларни простор десног колена под анестезијом изазваном смешом кетамина и ксилазина. Пацови су насумично подељени у четири групе: (1) група са физиолошким раствором без ињекције МИА, (2) група са МИА ињекцијом МИА, (3) група третирана СДЕ (200 мг/кг) са ињекцијом МИА и (4) група третирана индометацином (ИМ) (2 мг/кг) са ињекцијом МИА. Пацовима је орално даван СДЕ и ИМ 1 недељу пре ињекције МИА током 4 недеље. Дозирање СДЕ и ИМ коришћено у овој студији засновано је на онима коришћеним у претходним студијама [10,13,14].

2.4.3. Мерења расподеле тежине на задњим шапама

Након индукције остеоартритиса, првобитна равнотежа у способности ношења тежине задњих шапа је била поремећена. Тестер инкапацитета (Linton instrumentation, Норфолк, Велика Британија) је коришћен за процену промена у толеранцији на ношење тежине. Пацови су пажљиво смештени у мерну комору. Сила ношења тежине коју врши задњи екстремитет је усредњена током периода од 3 секунде. Однос расподеле тежине је израчунат следећом једначином: [тежина на десном задњем екстремитету/(тежина на десном задњем екстремитету + тежина на левом задњем екстремитету)] × 100 [15].

2.4.4. Мерења нивоа цитокина у серуму

Узорци крви су центрифугирани на 1.500 g током 10 минута на 4°C; затим је серум сакупљен и чуван на -70°C до употребе. Нивои IL-1β, IL-6, TNF-α, и PGE2 у серуму су мерени коришћењем ELISA комплета од R&D Systems (Минеаполис, MN, САД) према упутствима произвођача.

2.4.5. Квантитативна RT-PCR анализа у реалном времену

Укупна РНК је екстрахована из ткива коленског зглоба коришћењем TRI реагенса® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, САД), реверзно транскрибована у цДНК и PCR-амплификована коришћењем TM One Step RT PCR комплета са SYBR green (Applied Biosystems, Grand Island, NY, САД). Квантитативна PCR у реалном времену је извршена коришћењем Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR система (Applied Biosystems, Grand Island, NY, САД). Секвенце прајмера и секвенца сонде су приказане у табели.1Аликвоти узорака цДНК и једнака количина GAPDH цДНК су амплификовани помоћу TaqMan® Universal PCR мастер смеше која садржи ДНК полимеразу према упутствима произвођача (Applied Biosystems, Foster, CA, САД). PCR услови су били 2 мин на 50°C, 10 мин на 94°C, 15 с на 95°C и 1 мин на 60°C током 40 циклуса. Концентрација циљног гена је одређена коришћењем упоредне Ct методе (праг броја циклуса на укрштању између графикона амплификације и прага), према упутствима произвођача.

ФОБ цена:0,5 - 9.999 УСД / комад

Мин. количина поруџбине:100 комада/комада

Могућност снабдевања:10000 комада/комада месечно